CHEMICKÉ ZVESTI XV, Bratislava IDENTIFIKÁCIA ANTIBIOTIKA S-82 V. BETINA, P. NEMEC, J. BALAN, Š. KOVÁČ Katedra technickej mikrobiológie

Prepis

1 CHEMCKÉ ZVEST XV, 2 Bratslava 43 DENTFKÁCA ANTBOTKA S-2 V. BETNA, P. NEMEC, J. BALAN, Š. KOVÁČ Katedra technckej mkrobológe a bochéme a Katedra organckej chéme Slovenskej vysokej školy technckej v Bratslave ČSAV, Oddelene technckej mkrobológe Bologckého ústavu Slovenskej akadéme ved v Bratslave V predchádzajúcej prác [] sme referoval o zolác a o nektorých vlastnostach antbotka, ktoré sme predbežne označl S-2. Antbotkum má šroké spektrum účnnost, je účnné na nektoré grampoztvne a gramnegatvne baktére a na nektoré huby. Zstl sme aj to, že má neutrálny charakter. Použtm metód paperovej chromatografe a nfračervenej sa nám podarlo toto antbotkum dentfkovať. spektroskope Antbotká Expermentálna časť Materál a metódy Z dostupných neutrálnych antbotk z húb so šrokým spektrom účnnost sme 4 na porovnávane s antbotkom S-2 použl: aurancoglokladn, frekventn, glotoxn, patuln a vrdn. Súhrnný chromatogram Antbotkum S-2 a uvedené štandardy sme študoval metódou súhrnného chromatogramu [2] v 0 systémoch, použvaných v našom laboratóru: A. destlovaná voda, B. % acetón, C. тг-butanol nasýtený vodou, D. etylacetát nasýtený vodou, E. chloroform nasýtený vodou, F. benzén nasýtený vodou, G. acetón benzén -voda (24 : 5 : ), H. ггоргорапо benzén voda ( : 20 : 2),. n-butanol hexán acetón voda (9 : 20 : : 0 : ), K. metanol ^zoamylacetát voda (25 : 4 : ). Vysolovac chromatogram Na zstene prslušnost antbotk do jednotlvých skupn podľa vysoľovaceho chromatogramu [3, 4] sme použl stúpajúc rad koncentrác chlordu amónneho vo vode, ľ. destlovaná voda,. 0,5 %,.,0 %, V. 2,0 %, V 3,0 %, V. 5,0 %, V. 0,0 %: V. 20,0 %, X. nasýtený roztok NH 4 C. Detekca chromatogramov Polohu škvŕn aurancoglokladnu na súhrnnom a vysolovacom chromatograme sme zsťoval podľa pôvodného pomarančovožltóho sfarbena, vrdn dával na chromatogramoch žlté škvrny po vystaven účnku pár amonaku. Pre ostatné antbotká sme použl boautografckú detekcu pomocou Bacllus subtls (S-2, glotoxn a patuln) a pomocou Candda pseudotropcals (frekventn). nfračervené spektrá Použl sme dvojlúčový spektrofotometer UB» 0 Zess s NaCl kyvetam o hrúbke-,030 mm. Koncentráca vzorek bola 3,0 g/l chloroformu.

2 44 V. Betna, P.Nemec, J. Balan.. Š. Kováč Výsledky a dskusa Hodnoty RF ZO súhrnných chromatogramov študovaných antbotk sú zhrnuté v tab.. Tabuľka Hodnoty RF na súhrnných chromatogramoch porovnávaných antbotk Antbotkum A B Rp X V systéme C \ D \ E \ F \ O \ H K S-2 aurancoglokladn frekventn glotoxn patuln vrdn Z uvedených údajov vdeť, že súhrnný chromatogram antbotka S-2 sa nápadne podobá súhrnnému chromatogramu ghotoxnu, kým ostatné antbotká majú zásadne odlšné súhrnné chromatogramy. Pre porovnane uvádzame na obr. grafcké znázornene súhrnných chromatogramov antbotka S-2 a ghotoxnu N,0 0, 0.6 0,6 0,< 0.2 0,< Ц2 b Аъ r t Á Ák A A B C D E H * Obr.. Súhrnný chromatogram S-2 (O O ) a ghotoxnu ( ). ; m v v v v vm /л Obr. 2. Vysolovac chromatogram S-2 ( ) a glotoxnu (Д). Z tab. 2 vdeť, že vysoľovac chromatogram antbotka S-2 sa taksto nápadne podobá vysolovacemu chromatogramu ghotoxnu a lš sa od všetkých ostatných porovnávaných štandardov. Na obr. 2 sme grafcky znázornl vysolovace chromatogramy antbotka S-2 a ghotoxnu.

3 dentfkáca antbotka S-2 45 Tabuľka 2 Hodnoty Др na vysolovacch chromatogramoch porovnávaných antbotk Antbotkum S-2 aurancoglokladn frekventn glotoxn patuln vrdn / 3 RF X V systéme V 3 V 2 V 32 4 V 6 V 77 X ^ \ g 20 л ~ TN/ V o to rn \ y L - ^л A/Í o^ Osj ГП!! l!!! \!!!!! " O o> oo C\ <o <N! l!!! R ^ <\l vlnocet lem \, Л л ' \\f\ U Obr. 3. nfračervené spektrum antbotka S-2. -,4 A\ f KV t aj S 4 v- 60 АО 20 o-> ^ \ w CO со s - \ / \. л.. ro Й 04!! ' oo O! «N v l nočet j c n! ' \ и \ M * "' TÍľ WW V fy ; l/ Í!!! Щ l!! O O O D D O O g O O oo Jo v- JN Q O Obr. 4. nfračervené spektrum glotoxnu. Z výsledkov súhrnných a vysolovacch chromatogramov sme usudzoval, že antbotkum S-2 je pravdepodobne totožné s glotoxnom. Tento predpoklad sa potvrdl porovnanm nfračervených spekter obdvoch vzorek (obr. 3 a 4). Na nfračervenom spektre obdvoch vzorek vdeť slný absorpčný pás v oblast 060 cm", prslúchajúc deformačným vbrácám prmárnej alkoho-

4 46 V. Betna, P. Nemec, J. Balan, Š. Kováč lckej skupny, ako aj absorpcný pás v oblast 5 cm -, prslúchajúc deformačným vbrácám skupny C O. Velm ntenzvny absorpcný pás pr 7 cm - poukazuje na prtomnosť skupny C=0 (valenčné vbráce väzby C=0). Absorpcný pás pr 670 cm - patr vbrácám väzeb C=C. Absorpcný pás pr 425 cm - prslúcha deformačným vbrácám skupny CH 3 vazanej s duskom. Absorpcný pás s maxmom pr 20 cm - poukazuje na prtomnosť vnutromolekulovej vodkovej väzby. Na spektre sa však objavuje aj absorpcný pás pr 36 cm -, prslúchajúc vbrácám volných skupn OH. Absorpčně pásy väzeb S S sa nedal zachytť, pretože vbráce týchto skupn majú malú ntenztu a možno ch zstť v oblast okolo 5 4 cm -. Najlepše by sa dal dokázať na Ramanovom spektre. nfračervené spektrá však poukazujú na prtomnosť charakterstckých skupn glotoxnu v súlade so štruktúrou, ktorú udávajú M. R. Bell a spolupracovnc [5]: Сет он j f J ÔH 2 OH Súhrn Metódam paperovej chromatografe (súhrnný chromatogram, vysolovac chromatogram) sme porovnanm s autentckým vzorkam známych antbotk z húb dentfkoval antbotkum S-2 ako glotoxn. Výsledky chromatografckej dentfkáce sme potvrdl nfračervenou spektroskopou. ИДЕНТИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКА S-2 В. БЕТИНА, П. НЕМЕЦ, Й. БАДАН, Ш. КОВАЧ Кафедра технической микробиологии и биохимии и Кафедра органической химии Словацкой высшей технической школы в Братиславе ЧСАН, Отдел технической микробиологии Биологического института Словацкой академии наук в Братиславе Выводы Методами бумажной хроматографии (сборная хроматограмма, высаливающая хроматограмма) сравнением с аутентичными образцами знакомых антибиотиков из грибов мы идентифицировали антибиотик S-2 как глиотоксин. Результаты хроматографической идентификации мы подтвердили инфракрасной спектроскопией. Поступило в редакцию г.

5 dentfkáca antbotka S-2 47 DENTFCATON OF THE ANTBOTC S-2 V. BETNA, P. NEMEC, J. BALAN, Š. KOVÁČ Department of Techncal Mcrobology and Bochemstry, Department of Organc Chemstry, Slovak Poly techncal Unversty, Bratslava ÖSAV, Department of Techncal Mcrobology, Bologcal nsttute of the Slovak Academy of Scences, Bratslava Summary By comparng authentc samples of known antbotcs from molds by paper chromatographc methods ( summarzed chromatogram", saltng out paper chromatogram) the antbotc descrbed by us prevously as S-2 was dentfed as glotoxn. The results of the chromatographc dentfcaton were confrmed by nfrared spectroscopy. Receved on Aprl 2, LTERATÚRA. Nemec P., BetnaV., BalanJ., Antbotkum S-2 so šrokým spektrom účnnost, Chem. zvest 4, 674 (0). 2. shda N., Shrator Т., Myazak J., Studes n the Antbotc Substances from Actnomyces (XX). On the dentfcaton of Many Antbotcs by Paper Chromatographc Method, J. Antbotcs (A) 4, 505 (). 3. Myazak J., Omach K., Kamata Т., J. Antbotcs (A) 6, 6 (3); ct. poda [4]. 4. Ür J., New Types of Saltng out Paper Ghromatograms of Antbotcs, Nature 3, (9). 5. Bell M. R., Johnson J. R., Wld B. S., Woodward R. В., The Structure of Glotoxn, J. Am. Chem. Soc., (). Adresa autorov: Do redakce došlo nž. Vladmr Betna, G. Sc, prom, bológ, člen korešpondent SAV Pavel Nemec, nž. Jozef Balan, dr. nž. Štefan Kováč, C. Sc, Bratslava, Kollárovo nám. 2, Chemcký pavlón SVŠT.