BACTEC Standard Anaerobic/F Culture Vials Bujón so sójovo-kazeínovým hydrolyzátom PP085JAA 2008/01 Slovenèina POUŽITIE Kultivačné liekovky BACTEC Standard Anaerobic/F (redukovaný obohatený bujón so sójovo-kazeínovým hydrolyzátom s CO 2 ) sa používajú pre anaeróbne krvné kultúry. Základom je použitie s prístrojmi fluorescenčnej rady BACTEC, aby bola kvalitná kultivácia a rozmnožovanie anaeróbnych mikroorganizmov z krvi. ZHRNUTIE A VYSVETLENIE Testovaná vzorka sa oèkuje do jednej alebo viacerých liekoviek, ktoré sa vložia do fluorescenèného prístroja radu BACTEC na inkubáciu a pravidelné odèítanie. Každá liekovka obsahuje chemický senzor, ktorý dokáže zistit zvýšenie množstva CO 2 produkovaného rastom mikroorganizmov. Prístroj každých desat minút monitoruje nárast fluorescencie senzora, ktorý je úmerný množstvu prítomného CO 2 Pozitívne odèítanie indikuje predpokladanú prítomnost životaschopných mikroorganizmov v liekovke. Detekcia je obmedzená na mikroorganizmy, ktoré rastú na urèitom type pôdy. PRINCÍPY POSTUPU Ak sa v testovanej vzorke naoèkovanej do liekovky BACTEC nachádzajú mikroorganizmy, budú pri metabolizácii substrátov prítomných v liekovke produkovat CO 2. Fluorescenèný prístroj radu BACTEC bude monitorovat zvyšovanie fluorescencie senzora v liekovke spôsobené zvýšeným množstvom CO 2. Analýza rýchlosti a objemu nárastu CO 2 umožòuje fluorescenènému prístroju radu BACTEC urèit, èi je liekovka pozitívna, t. j. že testovaná vzorka obsahuje životaschopné organizmy. ZLOŽENIE Kultivaèné liekovky BACTEC Standard Anaerobic/F obsahujú pred spracovaním nasledujúce aktívne zložky: Zoznam zložiek spracovaná voda 40 ml bujón so sójovo-kazeínovým hydrolyzátom 3,0 % hmotnosti/objemu kvasnièný extrakt 0,4 % hmotnosti/objemu hydrolyzát zvieracieho tkaniva 0,01 % hmotnosti/objemu dextróza 0,25 % hmotnosti/objemu hemín 0,0005 % hmotnosti/objemu menadión 0,00005 % hmotnosti/objemu tioly 0,10 % hmotnosti/objemu bikarbonát sodný 0,04 % hmotnosti/objemu polyanetolsulfonát sodný (SPS) 0,025 % hmotnosti/objemu Všetky pôdy BACTEC sa dodávajú s pridaným CO 2. Anaeróbne pôdy sú redukované a pripravené s pridaným CO 2 a N 2. Zloženie možno upravit pod¾a požadovaného úèinku. Varovania a upozornenia Len na diagnostické použitie in vitro. Tento produkt obsahuje suchý prírodný kauèuk. V klinických vzorkách sa môžu nachádzať patogénne mikroorganizmy vrátane vírusov hepatitídy a vírusu ľudskej imunodeficiencie HIV. Pri práci so všetkými materiálmi kontaminovanými krvou a inými telesnými tekutinami dodržujte Štandardné pracovné postupy 1-4. Pred použitím každú liekovku skontrolujte, èi nenesie známky kontaminácie, ako je napríklad kal, vydutá alebo stlaèená zátka alebo vytekanie. NEPOUŽÍVAJTE liekovku, ak nesie známky kontaminácie. Kontaminovaná liekovka by mohla obsahovat pozitívny tlak. Ak použijete kontaminovanú liekovku na priamy odber, mohlo by dôjst k spätnému prietoku plynu alebo kontaminovanej pôdy do žily pacienta. Kontaminácia liekovky nemusí byt zrejmá na poh¾ad. Ak využijete postup priameho odberu, pozorne sledujte jeho priebeh, aby ste zabránili spätnému prietoku materiálov do tela pacienta. Nepoužívajte liekovky, ktoré sú zakalené, kontaminované alebo zmenili farbu (stmavli). Niekedy môže byt hrdlo sklenenej f¾aše prasknuté a pri odstraòovaní zátky alebo inej manipulácii sa môže odlomit. Zriedkavo sa stáva, že liekovka nie je dostatoène zapeèatená. V obidvoch prípadoch môže obsah liekoviek presakovat alebo sa vyliat, najmä ak sa liekovka prevráti. Ak bola liekovka naoèkovaná, zaobchádzajte s rozliatou tekutinou opatrne, pretože môže obsahovat patogénne organizmy/látky. Pred likvidáciou všetky naoèkované liekovky sterilizujte autoklávom. Liekovky s pozitívnou kultúrou urèené na subkultiváciu, farbenie atï. Pred oèkovaním vzorky uvo¾nite plyn, ktorý sa èasto vytvorí v dôsledku bakteriálneho metabolizmu. Odobratie vzorky vykonajte v biologicky bezpeènej komore a vo vhodnom obleèení vrátane rukavíc a masiek. Ïalšie informácie o subkultivácii nájdete v èasti Postup. Používajte injekèné striekaèky s permanentnými ihlami alebo s hrotmi znaèky Luer-Lok, aby sa minimalizovalo riziko vytekania vzorky do liekovky s kultúrou poèas oèkovania. Pokyny na uskladnenie Liekovky BACTEC sú pripravené na použitie hneï po dodaní a nevyžadujú oživenie ani zriedenie. Uchovávajte na suchom a chladnom mieste (2 25 C) mimo priameho slneèného žiarenia.
ODBER VZORIEK Odber vzoriek vykonávajte sterilnými postupmi, aby sa znížilo riziko kontaminácie. Zvyèajný objem vzorky je 5 7 ml. Odporúèa sa oèkovat vzorky do liekoviek BACTEC pri lôžku pacienta. Väèšinou sa na odber vzorky používa injekèná striekaèka ve¾kosti 10cc alebo 20cc s hrotom typu Luer-Lok. V prípade potreby možno použit držiak na ihly znaèky Vacutainer, súpravu na odber krvi znaèky Vacutainer, súpravu na odber krvi Vacutainer Safety-Lok alebo inú súpravu s hadicou typu butterfly. Pri použití ihly a súpravy s hadicou (priamy odber) pozorne sledujte smer toku krvi, keï zaèínate s odberom vzorky. Vákuum v liekovke väèšinou presiahne hodnotu 7 ml, takže používate¾ musí monitorovat odobratý objem prostredníctvom znaèiek v rozstupe 5 ml na štítku liekovky. Po odobratí požadovaných 5 7 ml zastavte tok ohnutím hadièky a odpojením súpravy hadièiek z liekovky BACTEC. Možno použit aj vzorky s objemom len 3 ml, ale rast nebude taký, ako pri väèších objemoch. Naoèkovanú liekovku BACTEC èo najrýchlejšie preneste do laboratória. POSTUP Odstráòte zátku liekovky BACTEC a skontrolujte, èi nie je prasknutá, kontaminovaná, príliš zakalená a èi nemá vydutú alebo stlaèenú zátku. Nepoužívajte liekovku, ak je akoko¾vek poškodená. Pred oèkovaním potrite membránu alkoholom (neodporúèa sa jód). Asepticky vstrieknite alebo priamo odoberte 5 7 ml vzorky do každej liekovky. Pri vzorkách s objemom 3 4 ml nebude rast taký, ako pri väèších objemoch (pozri èast Obmedzenia postupu). Naoèkované anaeróbne liekovky umiestnite èo najrýchlejšie do fluorescenèného prístroja radu BACTEC kvôli inkubácii a monitorovaniu. Ak naoèkovanú liekovku neumiestnite do prístroja hneï a pozorujete vidite¾ný rast, netestujte ju vo fluorescenènom prístroji radu BACTEC, radšej vykonajte subkultiváciu, Gramovo farbenie a zaobchádzajte s òou ako s pravdepodobne pozitívnou liekovkou. Pri liekovkách vložených do prístroja sa bude automaticky každých desat minút testovat doba trvania testovacieho protokolu. Fluorescenèný prístroj radu BACTEC urèí pozitívne liekovky (pozrite príslušnú používateľskú príručku pre fluorescenčný prístroj radu BACTEC). Senzor vo vnútri liekovky nebude na poh¾ad odlišný v pozitívnej a negatívnej liekovke; fluorescenèný prístroj radu BACTEC však dokáže urèit rozdiel vo fluorescencii. Ak bude na konci testu negatívna liekovka na prvý poh¾ad pozitívna (prejavy: krv èokoládovej farby, vydutá membrána, rozložená alebo ve¾mi tmavá krv), vykonajte subkultiváciu a Gramovo farbenie a zaobchádzajte s òou ako s pozitívnou liekovkou. Pozitívne liekovky treba subkultivovat a pripravit na Gramovo farbenie na sklíèku. Vo ve¾kej väèšine prípadov budú organizmy vidite¾né a lekárovi možno oznámit predbežný výsledok. Subkultivácie na selektívnych pôdach a predbežný priamy bakteriostatický test citlivosti možno pripravit z tekutiny obsiahnutej v liekovkách BACTEC. Subkultivácia. Pred subkultiváciou obrát te liekovku hore dnom a na membránu položte handrièku napustenú alkoholom. Tlak v liekovke uvo¾níte vpichnutím sterilnej ihly s vhodným filtrom alebo tampónikom cez handrièku s alkoholom a membránu. Ihlu treba vybrat po uvo¾není tlaku a pred odobratím vzorky z liekovky na subkultiváciu. Zavedenie a vybratie ihly by sa malo spravit priamoèiarym pohybom, bez akýchko¾vek toèivých pohybov. Za úèelom získania maximálneho poètu izolátov môžete negatívne kultúry najprv skontrolovat farbením alebo subkultiváciou a potom ich zlikvidovat ako negatívne. KONTROLA KVALITY Kontrola kvality sa musí uskutočniť v súlade s nariadeniami, prípadne akreditačnými požiadavkami platnými na miestnej, celoštátnej alebo federálnej úrovni a štandardnými laboratórnymi postupmi pri kontrole kvality. Používateľ by sa mal oboznámiť s usmernením Inštitútu klinických a laboratórnych noriem CLSI (predtým NCCLS) a odporúčaniami Dodatkov o zvýšení kvality klinických laboratórií (CLIA), týkajúcimi sa primeraných postupov pri kontrole kvality. Liekovky NEPOUŽÍVAJTE po dátume exspirácie. NEPOUŽÍVAJTE kultivaèné liekovky, ktoré nesú akéko¾vek známky prasknutia alebo chyby; takú liekovku vhodným spôsobom zlikvidujte. Každé balenie (kartón) pôd obsahuje Osvedèenia o kontrole kvality. Osvedèenia o kontrole kvality uvádzajú testovacie organizmy vrátane kultúr ATCC uvedených v norme komisie CLSI, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media (Kontrola kvality pre komerène pripravené kultivaèné pôdy). 5 Èasový rozsah pred detekciou v hodinách pre každý z nasledujúcich organizmov je 72 hod: Clostridium histolyticum Streptococcus pneumoniae ATCC 19401 ATCC 6305 Clostridium perfringens Escherichia coli ATCC 13124 ATCC 25922 Bacteroides fragilis* Staphylococcus aureus ATCC 25285 ATCC 25923 Bacteroides vulgatus ATCC 8482 *Kmeò CLSI Ďalšie informácie o kontrole kvality pre fluorescenčný prístroj radu BACTEC nájdete v príslušnej používateľskej príručke k fluorescenčnému prístroju radu BACTEC. VÝSLEDKY Pozitívna liekovka je oznaèená fluorescenèným prístrojom radu BACTEC a indikuje pravdepodobnú prítomnost životaschopných organizmov liekovke. OBMEDZENIA POSTUPU Kontaminácia Pri odoberaní a oèkovaní vzorky do liekovky BACTEC treba postupovat opatrne, aby sa zabránilo kontaminácii vzorky. Kontaminovaná vzorka sa odèíta pozitívne, nebude však predstavovat relevantnú klinickú vzorku. K takému záveru musí používate¾ dôjst na základe takých faktorov, ako je typ izolovaných organizmov, výskyt rovnakého organizmu vo viacerých kultúrach, pacientov chorobopis atï.
Množenie organizmov citlivých na SPS zo vzoriek krvi Keïže krv môže voèi organizmom citlivým na SPS (napríklad niektoré druhy Neisseria) neutralizovat toxicitu SPS, je prítomnost optimálneho objemu krvi (5 7 ml) pri množení týchto organizmov výhodou. Niektoré nároèné organizmy, napríklad niektoré druhy baktérie Haemophilus, vyžadujú rastové faktory, napríklad NAD alebo faktor V, ktoré sa dajú získat zo vzoriek krvi. Ak je objem vzorky krvi 3,0 ml alebo menej, bude zrejme potrebné použit na množenie týchto organizmov vhodný doplnok. Ako nutričné doplnky môžete použiť doplnok pre náročné mikroorganizmy BACTEC FOS. Organizmy, ktoré nie sú životaschopné Rozter s Gramovým farbením z kultivaènej pôdy môže obsahovat malé množstvo organizmov, ktoré nie sú životaschopné, pochádzajúcich zo zložiek pôdy, farbiacich èinidiel, oleja na imerziu, sklenených sklíèok a vzoriek používaných na oèkovanie. Pacientove vzorky môžu obsahovat aj organizmy, ktoré nerastú na kultivaènej pôde alebo na pôdach používaných na subkultiváciu. Takéto vzorky pod¾a potreby subkultivujte na zvláštnych pôdach. 6 Množenie baktérie Streptococcus pneumoniae V aeróbnych pôdach je baktéria S. pneumoniae zvyèajne na prvý poh¾ad aj po otestovaní prístrojom pozitívna, ale v niektorých prípadoch sa po Gramovom farbení ani po bežnej subkultivácii nepreukáže žiadny organizmus. Ak bola naoèkovaná aj anaeróbna liekovka, organizmus je väèšinou možné množit aeróbnou subkultiváciou anaeróbnej liekovky, je totiž dokázané, že tento organizmus v anaeróbnych podmienkach dobre rastie. 7 Všeobecné predpoklady Optimálne množenie izolátov dosiahnete pridaním 5 7 ml krvi. Použitie menšieho alebo väèšieho objemu môže nepriaznivo ovplyvnit množenie alebo dobu detekcie. Krv môže obsahovat bakteriostatické látky alebo iné inhibítory, ktoré môžu spomalit rast mikroorganizmov alebo ho zastavit. Ak sú prítomné organizmy, ktoré neprodukujú dostatoèné množstvo CO 2 na to, aby ich systém zistil, alebo ak sa objavil výrazný rast pred umiestnením liekovky do systému, môže dôjst k nepravému negatívnemu odèítaniu. Nepravý pozitívny výsledok sa môže objavit aj pri vysokom poète bielych krviniek. Používate¾ by si mal byt vedomý možných odlišných výsledkov pri izolácii niektorých organizmov, ktoré môžu byt zapríèinené povahou biologických materiálov v produktoch s pôdami a inherentnou variabilitou mikroorganizmov. OÈAKÁVANÉ HODNOTY A ŠPECIFICKÉ VLASTNOSTI Pozrite príslušnú používateľskú príručku pre fluorescenčný prístroj radu BACTEC. DOSTUPNOSŤ Kat. č. Popis 442191 BACTEC Standard Anaerobic/F Culture Vials (kultivačné liekovky), 50 liekoviek v balení. POUŽITÁ LITERATÚRA 1. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: 53-80. 3. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 5. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2004. Approved Standard M22-A3. Quality control of commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.). 2007. Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Howden, R.J., J. Clin. Path. 1976, 29:50-53.
B Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 21152 USA 800-638-8663 BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46 ATCC is a registered trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Vacutainer, Safety-Lok and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2008 BD.